熒光掃描（四標(biāo)）

【產(chǎn)品信息】

石蠟切片免疫熒光實(shí)驗(yàn)報(bào)告

一、實(shí)驗(yàn)器材及試劑

1. 實(shí)驗(yàn)器材

• 主要實(shí)驗(yàn)試劑

• 石蠟切片免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟
• 石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min-無(wú)水乙醇Ⅰ6min- 95%酒精6min-85%酒精6min-蒸餾水洗。
• 抗原修復(fù)：組織切片置于盛滿EDTA修復(fù)液（PH8.0）的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)，中火8min?；?min中低火7min，此過(guò)程中應(yīng)防止緩沖液過(guò)度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。
• 阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶：切片加上3%的雙氧水，室溫孵育25min，將玻片置PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。
• 血清封閉:切片稍甩干后用組化筆在組織周?chē)?huà)圈（防止抗體流走），在組化圈內(nèi)滴加3%BSA 均勻覆蓋組織，室溫封閉30min。
• 加一抗：切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加按一定比例稀的抗體覆蓋組織。切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過(guò)夜。
• 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的二抗覆蓋組織，避光室溫孵育50min。
• 信號(hào)放大:將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min 。滴加相對(duì)應(yīng)顏色Flare信號(hào)放大試劑，3-5min.將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min 。
• DAPI復(fù)染細(xì)胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。
• 封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。
• 鏡檢拍照：切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像，根據(jù)對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)選擇相應(yīng)通道。